Коллеги, добрый день! Может кто то сталкивался с проблемой: окрашиваем

Question

Коллеги, добрый день! Может кто то сталкивался с проблемой: окрашиваем

образцы периферической крови с пермеабилизацией. При этом неокрашенный образец выглядит по fsс ssc нормально, а окрашенный сползает ниже обеих осей. То есть фактически остается только популяция гранулоцитов. Анализируем на Novocyte 3000, возможности увеличить напряжение нет, насколько я знаю. В чем может быть дело?

0

30.08.2023

12 ответов

9 просмотров

Evgeniya Автор вопроса

Kate Bryushkova
Здравствуйте! Можно увидеть пример изображения? Оц...

Что вы имеете ввиду под "сьелись"?)

0

8 месяцев назад

Kate Bryushkova

Evgeniya
Что вы имеете ввиду под "сьелись"?)

В зависимости от того, что и как долго вы использовали для фиксации/пермеабилизации, клетки можно разрушить в клочья

0

8 месяцев назад

Лесная Куница

Kate Bryushkova
В зависимости от того, что и как долго вы использо...

Уже выше, кажется, упоминалось, но: не посоветуете какие-то оптимальные протоколы фиксации-пермеабилизации при учёте, что нет специальных kit-ов?

0

8 месяцев назад

Kate Bryushkova

Лесная Куница
Уже выше, кажется, упоминалось, но: не посоветуете...

На память не подскажу сейчас, но да, есть протоколы конечно

0

8 месяцев назад

Evgeniya Автор вопроса

Kate Bryushkova
В зависимости от того, что и как долго вы использо...

Набор BD Cytofix/cytoperm, 25 минут. Суть в том, что вариации от образца к образцу. Это пациент после курса химиотерапии, возможно клетки более чувствительные становятся

0

8 месяцев назад

Kate Bryushkova

Evgeniya
Набор BD Cytofix/cytoperm, 25 минут. Суть в том, ч...

А центрифугировали после фиксации?

0

8 месяцев назад

Evgeniya Автор вопроса

Kate Bryushkova
А центрифугировали после фиксации?

да, 800g, 6 минут

0

8 месяцев назад

Kate Bryushkova

Evgeniya
Набор BD Cytofix/cytoperm, 25 минут. Суть в том, ч...

Скорее всего вы работаете где-то на пределе допустимости методики. 25 минут многовато как будто. Попробуйте немножко поуменьшать время? Может вам и 15 хватит, а качество образцов при этом вырастет. Фикс/перм такая штука, условия подбирать приходится практически всегда

0

8 месяцев назад

Kate Bryushkova

Evgeniya
да, 800g, 6 минут

Тогда должны были сесть... Мы для надёжности по 1000 крутим, но у нас внутриядерная окраска

0

8 месяцев назад

Эрик

Evgeniya
да, 800g, 6 минут

А центрифуга качельная или с фиксированным углом? Отмывка же не одна в протоколе, а много -- га фиксированных углах теряется очень много.

0

8 месяцев назад

Olga Savelieva

Я правильно понимаю, что неокрашенный образец идёт по такому же протоколу с фиксацией и перемеабилизацией, только без антител? При этом в неокрашенном контроле по FS/SS, всё нормально, а в окрашенных образцах появляется эта проблема?

0

8 месяцев назад

Kate Bryushkova · Accepted Answer

Здравствуйте! Можно увидеть пример изображения? Оценивали ли качество образца после фиксации/пермеабилизации на другом приборе? Если речь идёт именно о параметрах FS/SS есть вероятность, что просто слишком сильно "съелись" клетки и вы просто наблюдаете обломки. Или клетки не сели после отмывки при окрашивании и вы опять же наблюдаете обломки

Похожие чаты

Коллеги, добрый день! Может кто то сталкивался с проблемой: окрашиваем

12 ответов

Похожие вопросы