Добрый день! Коллеги, есть ли у кого опыт использования DAPI

Question

Добрый день! Коллеги, есть ли у кого опыт использования DAPI

для отделения мертвых клеток от живых при проточной цитометрии? В теории же не должен сильно проникать через неповреждённую мембрану.
Поделитесь протоколом, если не сложно

0

08.09.2024

3 ответов

4 просмотра

Stas Rybtsov

DAPI не проникает в живые клетки может быть первые 5 минут когда динамика проникновения в перфорированные клетки гораздо быстрее. Однако если окрашивание оставить на час и более то он начнёт красить и живые клетки.

0

1 месяц назад

Alexander Shumeev

Протокол простой: добавляете перед измерением, отмывать не нужно. Смотрите на графике FSC vs DAPI (для крови можно SSC vs DAPI). Но DAPI нужно титровать, так как оптимальная концентрация будет разная для разных приборов. Убейте клетки, например, теплом, потом смешайте с живыми и покрасьте несколькими концентрациями, начиная с 1 мкг/мл. У нас, например, сток 10 мг/мл, финальное разведение 200 тыс. раз (для фортессы)

0

1 месяц назад

Stanislav · Accepted Answer

Stanislav

Я добавляю 0.2 мкл дапи на 300-500 мкл пробы, смотрю через 5-30 минут, получается вполне себе.

0

1 месяц назад

Похожие чаты

Добрый день! Коллеги, есть ли у кого опыт использования DAPI

3 ответов

Похожие вопросы