цитометрии, оба кролики к сожалению и никак иначе. Как бы мне их покрасить совместно? Конъюгировать с красителем первично? Есть еще варианты/советы? Спасибо ❤️
Первичные или с одинаковым флуорохромом?
Нужно насортировать или просто посмотреть, сколько есть двойных положительных клеток? Сами маркеры в большом проценте в целом экспрессированы? Если да, то поиграть с арифметикой: разделить пробы на три части, одну покрасить такими, другую сякими, третью обоими, дальше если в третьей процент просто складывается, то нет двойных положительных. Если процент меньше суммы, то вычесть из суммы реальный процент -- столько двойных положительных.
ага, такое предложили. сорт пока не очень вариант, но мы сделаем в будущем, там будет огонечек
Я делала такое в гистохими со вторичными FAB антителами (но у меня такие только против крысы есть). Предварительно инкубировала по 15 минут первичные и вторичные в соотнош 1:2, потом красила одной парой, отмывала и красила второй парой. Получалось нормально
о, вот я про такое думал
Мы тоже так пробовали. И при окраске второй парой добавляли даже только вторые вторичные. И все равно антитела крестили.
Я красил последовательно, все было ок. Одни первичные- вторичные, отмывка и следующая пара с другими вторичными. Сейчас не помню конкретно эксперимента, но отложилось, что так можно
Но наверное на второй итерации, вторичные антитела могли подкрасить и первичные из первой пары? Или неужели все эпитопы надёжно закрылись в первый раз???
По памяти все закрылось. Пытаюсь вспомнить, что это было. Я 100% не ручусь, но я бы точно попробовал. И те, что тусклее первыми вроде по логике надо, чтоб вторые побыстрее докрасить.
Обсуждают сегодня